Màquina d'extracció i detecció d'àcids nucleics totalment automàtica de New Tech

Cinc forces:
● Instrument configurat amb l'etapa d'extracció i purificació d'àcids nucleics
● Instrument configurat amb mòdul d'extracció d'ultrasons
● Instrument configurat amb totalment automàtic
● Instrument configurat amb amplificació de temperatura variable
● Instrument configurat amb un kit de reactius totalment tancat

1.S'han d'extreure i purificar els reactius de detecció d'àcids nucleics?
El principi de detecció d'àcids nucleics és el següent: sota l'acció de l'encebador, l'ADN polimerasa s'utilitza per dur a terme l'amplificació de la reacció en cadena sobre l'ADN/ARN plantilla (que requereix transcripció inversa de NA), i després es detecta la quantitat de senyal fluorescent alliberat per determinar si la mostra conté l'àcid nucleic (ADN/ARN) del patogen a detectar.

1) Les mostres que no s'han extret o purificat poden contenir molts components que afecten el resultat final: nucleasa (que pot dissoldre l'àcid nucleic diana i provocar fals negatiu), proteasa (que pot reduir l'ADN polimerasa i provocar fals negatiu), metall pesat sal (que condueix a la inactivació de la sintasa i provoca falsos positius), PH massa àcid o massa alcalí (que pot provocar el fracàs de la reacció), ARN incomplet (que provoca un error de transcripció inversa fals negatiu).

2) Algunes mostres són difícils d'amplificar directament: gram-positius i alguns paràsits, a causa de les seves parets cel·lulars gruixudes i altres estructures, si no passen pel procés d'extracció i purificació d'àcids nucleics, el kit sense extracció pot fallar per a aquests casos. mostres.

Per tant, es recomana seleccionar el kit de prova o l'instrument configurat amb l'etapa d'extracció d'àcid nucleic.

2. Extracció química o extracció física per fragmentació ultrasònica?
En termes generals, l'extracció química es pot aplicar a la majoria del pretractament i la purificació.Tanmateix, en bacteris Gram-positius de paret gruixuda i alguns paràsits, també es dóna el cas que l'extracció química no pot obtenir plantilles d'àcid nucleic eficaços, donant lloc a una detecció falsa negativa.A més, l'extracció química sovint utilitza agents forts, si l'elució no és completa, és fàcil introduir àlcali fort al sistema de reacció, donant lloc a resultats inexactes.

La fragmentació ultrasònica utilitza la trituració física, que ha estat utilitzada amb èxit per GeneXpert, una empresa líder en el camp de POCT per a ús humà, i té un avantatge absolut en l'extracció d'àcids nucleics d'algunes mostres complexes (com ara Mycobacterium tuberculosis).

Per tant, es recomana seleccionar un equip de prova o un instrument configurat amb un pas d'extracció d'àcid nucleic.i és òptim si hi ha un mòdul d'extracció d'ultrasons.

3. Manual, semiautomàtic i totalment automàtic?
Aquest és un problema de cost laboral i d'eficiència laboral.Actualment, els hospitals d'animals de companyia sense personal suficient, i l'extracció i detecció d'àcids nucleics és un treball que requereix certes habilitats i experiència.No hi ha dubte que la màquina d'extracció i detecció d'àcids nucleics totalment automàtica és l'opció perfecta.

4. Amplificació de temperatura constant o amplificació de temperatura variable?
La reacció d'amplificació és un enllaç de detecció d'àcids nucleics, i la tecnologia professional implicada en aquest enllaç és complexa.A grans trets, els enzims s'utilitzen per amplificar l'àcid nucleic.En el procés d'amplificació, es detecta el senyal de fluorescència amplificada o el senyal de fluorescència incrustat.En termes generals, com més aviat aparegui el senyal de fluorescència, més gran serà el contingut del gen objectiu de la mostra.

L'amplificació de temperatura constant és una amplificació d'àcid nucleic a una temperatura fixa, mentre que l'amplificació de temperatura variable és una amplificació cíclica estrictament segons desnaturalització-recuit-extensió.S'ha dut a terme el temps d'amplificació de temperatura constant, mentre que el temps d'amplificació de temperatura variable es veu molt afectat per la velocitat d'augment i descens de la temperatura de l'instrument (en l'actualitat, molts fabricants han pogut fer 40 cicles d'amplificació en uns 30 minuts).

Si les condicions del laboratori són bones i la zonificació és estricta, és raonable dir que la diferència de precisió entre ambdues no serà gran.Tanmateix, l'amplificació de temperatura variable sintetitzarà més productes d'àcid nucleic en un temps relativament més curt.Per als laboratoris sense zonificació estricta i personal de formació professional, el risc de fuga d'aerosols d'àcid nucleic serà més gran, el fals positiu es produeix un cop es produeix la fuita i és extremadament difícil d'eliminar.

A més, l'amplificació a temperatura constant també és més propensa a l'amplificació no específica quan la mostra és complexa (la temperatura de reacció relativa és més baixa i com més alta sigui la temperatura d'extensió, millor serà l'especificitat d'unió del primer).

Pel que fa a la tecnologia actual, l'amplificació de temperatura variable és més fiable.

5. Com evitar el risc de fuites de productes d'amplificació d'àcids nucleics?
Actualment, molts fabricants trien el tub de PCR de tipus glàndula com a tub de reacció d'àcid nucleic, que està segellat per fricció, i la desnaturalització de temperatura en la desnaturalització de temperatura variable en l'amplificació de PCR de temperatura variable arriba als 90 graus.
centígrads.El procés repetit d'expansió amb calor i contracció amb fred és un gran repte per al segellat del tub de PCR, i el tub de PCR de tipus glàndula és relativament fàcil de provocar fuites.

És preferible adoptar la reacció amb un kit/tub completament segellat per evitar la fuita del producte de reacció.Seria perfecte si es pogués elaborar un kit totalment segellat per a l'extracció i detecció d'àcids nucleics.

Així, la nova màquina d'extracció i detecció d'àcids nucleics totalment automàtica de New Tech té les cinc opcions òptimes anteriors.